恶性肿瘤与冠心病血瘀证TGF-β/Treg介导免疫失衡的差异性研究

Blood stasis is the common main pathological factors of the coronary heart disease and malignant tumor. Promoting blood circulation and removing blood stasis has become the mainstream treatment for cornoary heart disease, but still is questioned for malignant tumor. Immune imbalance is the fundamental internal factors of the development in disease. Our previous clinical and experimental studies have shown, either coronary heart disease or malignant tumors, have a certain degree of immune imbalance. It is important of the number and function of Treg cells on immune homeostasis maintenance, and TGF-β1 is the important factor for maintenance of Treg cell number and function. There is different or even opposite state of them mediated immune imbalance in the patients with coronary heart disease patients with malignant tumor. Therefore, regarding TGF-β/Treg-T as the axis of the serum T cell subsets, cytokines and related protein expression imbalance as the breakthrough point, we design this study on the difference of immunue imbalance in blood stasis syndrome between advanced malignant tumor and coronary heart disease, as well as the correlation of different immune imbalance level and TCM syndrome types, and different Western medicine type, coagulation parameters, and disease prognosis, to provied a basis for the deepen research on blood stasis syndrome essece, to provide the molecular basis for microcosmic syndrome differentiation of blood stasis syndrome in malignant tumor, for screening effective promoting blood circulation to remove blood stasis and target, for the combination of disease and syndrome differentiation in clinical application.

血瘀是冠心病与恶性肿瘤共同的主要病理因素，活血化瘀已成为冠心病治疗的主流，但在恶性肿瘤治疗中却备受质疑。免疫失衡是疾病发生发展的根本内在因素。我们既往的临床和实验研究表明，无论是冠心病还是恶性肿瘤，均存在一定程度的免疫失衡。Treg细胞的数量和功能状态对机体免疫稳态的维持有重要意义，TGF-β1是维持Treg细胞数量和功能的重要因子,以他们介导的免疫失衡在冠心病与恶性肿瘤患者体内却呈现不同甚至是相反的状态。因此，我们设计了TGF-β/Treg介导的血清T细胞亚群、细胞因子及相关蛋白表达失衡为切入点，研究晚期恶性肿瘤和冠心病血瘀证的免疫失衡状态的差异性，以及其不同的免疫失衡水平与中医兼证、不同西医分型、凝血指标、疾病预后等因素的相关性，为不同疾病血瘀证本质的深化研究提供依据，为恶性肿瘤血瘀证的微观辨证、筛选有效的活血化瘀中药及作用靶点、为辨病与辨证相结合在临床中的应用提供分子基础。

背景：目前，血瘀证是恶性肿瘤和冠心病公认的中医病理基础，但恶性肿瘤的活血化瘀治疗却备受争议。因此，我们设计了该研究探讨晚期恶性肿瘤和冠心病血瘀证的TGF-β/Treg介导的免疫失衡状态的差异性。目的：探讨晚期恶性肿瘤和不稳定心绞痛中血瘀证患者以Treg-T为轴心的血瘀证分级、凝血指标、血清T细胞亚群、细胞因子及相关蛋白表达水平的差异性。方法：本研究采用横断面调查方法，自2013年12月～2016年2月纳入来自中国中医科学院西苑医院肿瘤科和心血管科门诊及病房的100例晚期恶性肿瘤患者和100例不稳定型心绞痛患者，所有纳入病例均符合血瘀证诊断标准，并进行知情同意。主要检测指标包括：患者一般资料、心绞痛计分、血瘀证评分、凝血功能、流式细胞仪三色荧光直接免疫法检测T、B淋巴细胞亚群，实时荧光定量RT-PCR检测TGF-βmRNA、VEGFmRNA转录水平，Western Blot法检测TGF-β、VEGF蛋白定量，ELISA法检测外周血细胞因子IL-2、IL-4、IL-6、IL-8、IL-10、IL-18、TNF-α水平。结果：晚期恶性肿瘤和不稳定型心绞痛两组年龄、性别相比无显著性差异（P>0.05）。与不稳定心绞痛患者相比，晚期恶性肿瘤患者的血瘀证积分较高，有显著性差异（P<0.05）。两组患者的凝血酶原时间PT、凝血酶原时间比值INR、凝血酶时间TT、纤维蛋白原浓度Fbg和血浆D－Dimer比较均有显著性差异（P<0.05）。T、B淋巴细胞亚群检测结果示，两组患者双阳性T细胞DNT、总B细胞、B1细胞、B2细胞、NK细胞、活化辅助T细胞、Treg细胞、Th1细胞、Th2细胞比较均有显著性差异（P<0.05）。Western Blot实验蛋白浓度结果显示，晚期恶性肿瘤患者和不稳定心绞痛患者外周血的TGF-β和VEGF蛋白含量与正常人对照均无明显差异。RT-PCR法显示晚期恶性肿瘤患者TGF-β含量显著高于正常对照组（P<0.05）。不稳定型心绞痛组的IL4、TNFa含量与正常组相比、晚期恶性肿瘤组的IL4、IL8含量与正常组相比均有显著性差异（P<0.05），但晚期恶性肿瘤和不稳定型心绞痛两组之间细胞因子浓度均无明显差异。结论：晚期恶性肿瘤和不稳定心绞痛血瘀证患者在Treg／TGF—β介导的免疫应答系统中存在差异，其内在机理需要进一步深入研究。